Методы стерилизации посуды, инструментов и сред

Материалы и оборудование: автоклав, сушильный шкаф, пергаментная бумага, инструменты (пинцеты, шпатели, лабораторная посуда (чашки Петри, колбы и т.д.).

Перед выполнением операций в ламинарий-боксе, необходимо подготовить его к работе. Для этого, при наличии бактерицидных ламп, используют стерилизацию ультрафиолетом течение 30 мин, или протирают рабочую поверхность 70-96% этаноловым спиртом. Для соблюдения условий стерильности необходимо выдержать (2-3 часа при температуре 160-180 °) в сушильном шкафу инструменты и посуду. Посуду можно стерилизовать автоклавированием при 1-2 атмосфере в течение 25 минут. Непосредственно перед работой инструменты погружают в этанол и обжигают в пламени спиртовки.

Грязную посуду моют кислотным или щелочным методом, затем тщательно промывают проточной водой и ополаскивают дистиллятом. Чистую посуду высушивают в сушильном шкафу и хранят в закрытых шкафах.

Все работы по стерилизации необходимо проводить с соблюдением требований техники безопасности.

Приготовление и стерилизация питательных сред.
 — Для удобства приготовления питательных сред готовят маточные растворы макро-и микроэлементов согласно рецептам, взвешивая и растворяя отдельно каждую добавку в новой порции дистиллированной воды. Вода должна быть качественной, поскольку от нее зависит получение качественного результата.
Раствор фитогормонов готовят следующим образом:

• ауксины: 2,4 Д, ИОК, ИМК, НОК-растворяют 100 мг вещества в 0,5-2мл этанола, подогревают, добавляют воды до 100 мл (концентрация 1 мг / мл);
• цитокинины: Кин, ВЭА, БАП — растворяют 100 мг вещества в 2 мл 0,5 н НСl, подогревают, доводят водой до 100 мл;
• гиббереллины: ГК3 — растворяют в воде;
• абсцизины: АБК — растворяют в 3 мл 70% этанола, доводят водой до нужного объема.
• Растворы витаминов: тиамин НС1 (В1), пиродиксин (В6), никотиновую кислоту (РР), аскорбиновую кислоту (С), фолиевую кислоту (В0), биотин (Н), парааминбензойну кислоту, Са — пантотенат, цианкобаламин (В! 2), рибофлавин (В2) — растворяют в воде (концентрация 1мг/мл, или 0,1 мг / мл).

Полученные маточные растворы хранят в холодильной камере при температуре +4 ° С. Растворы витаминов замораживают в небольших количествах, поскольку при длительной заморозке они теряют свои свойства.